b型流感嗜血杆菌多群IgG抗体试剂盒

产品说明:

  本试剂盒在微孔条上预包被经特殊处理的b-型流感嗜血杆菌多糖,配以碱性磷酸酶标记抗人IgG及p-硝基苯基磷酸盐(PNP)溶液显色剂等其它试剂,采用间接酶联免疫法原理检测人血清或血浆中的b-型流感嗜血杆菌多糖(IgG)抗体含量。

试剂盒组成:

b-型流感嗜血杆菌多糖预包板96孔
b-型流感嗜血杆菌抗体参比品0.5 μg/0.5 ml/支
b-型流感嗜血杆菌抗体阳性对照血清1支
b-型流感嗜血杆菌抗体阴性对照血清1支
羊抗人IgG碱性磷酸酶结合物 10 ml×1支
浓缩洗涤液(20×) 50 ml×1瓶
底物缓冲液 10 ml×1瓶
底物(PNP) 5mg/片×2片
终止液 6 ml×1瓶
说明书 1份
封板膜 1张

使用说明:

操作步骤1、配液:将50ml浓缩洗涤液(20×)用蒸馏水或去离子水稀释至1000ml备用,此洗涤液同时作为稀释液使用。
2、参比品的稀释: 每支冻干参比品溶于1.667 ml稀释液,即为0.3 μg/ml。将参比品稀释为0.300μg/ml、0.100μg/ml、0.0333μg/ml、0.0111μg/ml、0.0037μg/ml、0.0012μg/ml、0.0004μg/ml、0.0001μg/ml浓度的系列,备用(详见附件1)。 (即1∶3倍倍比稀释:0.4ml稀释液+0.2ml上个稀释倍数参比品)
3、样品稀释:先将样品作1∶50稀释(精确取20μl血清加入980μl洗涤液中混匀)备用。
4、加样:第1行(空白对照A1)和阴性、阳性对照孔(各1~2孔)、参比品各浓度的孔不加稀释液。每份待检标本做1∶50、1∶150、1∶450、1∶1350四个稀释度。
5、参比品加样:将8个稀释度的参比品各取100μl加到酶标板相应的孔内。空白对照孔不加样品。
6、阳性对照、阴性对照各加1-2孔,每孔100μl。
7、置25℃孵育120分钟。
8、洗涤:将孔内液体甩干,用洗涤液充分洗涤4遍,甩干。
9、直接加入液体酶:每孔(包括空白对照孔)加入液体酶标试剂100ml,置25℃孵育2小时。
10、洗涤:将孔内液体甩干,用洗涤液充分洗涤5遍,甩干。
11、显色:将铝铂袋中2片底物(p-硝基苯基磷酸盐)用药勺取出后溶解于10.0ml底物缓冲液中,完全溶解后,每孔加入100ml,25℃显色2小时后每孔加终止液50ml,放置5分钟后测定。
12、测定:设定酶标仪波长为405nm(建议用双波长检测参比波长≥600nm)用空白孔调零点后测定各孔OD值。
结果判定1、空白孔吸光值<0.1,阳性对照吸光值 > 0.50 ,阴性对照吸光值 < 0.25试验成立。
2、以参比品抗体浓度作为横坐标、吸光值作为纵坐标,作四参数对数分析法(y = b+(a-b)/(1+xc)^d )计算,回归方程的拟合度R2≥0.95。
3、待检样品各稀释度的吸光值(y)在标准曲线对应范围内的值代入方程,计算出不同稀释度时血清样品的抗体含量( X mg/ml)。
4、将抗体含量乘以对应的样品稀释度求出血清抗体含量的均值。
5、最好选择样品吸光值在0.3~1.5之间的代入方程式,此时计算结果较为真实。样品吸光值超出方程范围的吸光值不得代入方程计算抗体含量。
注意事项1、试剂盒从冷藏环境中取出后,在室温平衡15-30分钟方可使用。
2、未用完的预包酶标微孔条用封板膜封存在冷藏环境,7-10天内用完。
3、抗人酶结合物加入稀释后可以置37℃保温5分钟便于完全溶解;溶解后未用完酶结合物置-20℃保存。
4、酶标板洗涤时各孔均需加满洗液,防止非特异性抗体、游离酶残留。
5、加样时应先加样品,后加标准品,再加阴性对照、阳性对照。整个加样过程应在15分钟内完成。
6、终止液为3M氢氧化钠,使用时应注意安全。
7、操作应按说明书严格进行,不同批次试剂不得混用。
8、人群流行病学调查可做4个稀释度或2个稀释度(1∶50、1∶150、1∶450、1∶1350)。
9、样品吸光值超出拟合方程范围的吸光值不得代入方程计算抗体含量。样品的抗体浓度通过多个稀释度的平均值计算得到,且不同稀释浓度得出的抗体浓度的变异系数(CV)大于30%,需要检查数据中是否有不合适的结果(如重复性不好,和/或非线性),如果没有发现明显的原因,则要重新测定。
10、每次测定均应同时作标准曲线。
11、每个试剂盒测定的标准曲线只能用于本试剂盒酶标板测定的血清,不能用于其他试剂盒测定结果的计算。
储存条件和有效期1、储存条件:2-8℃。
2、有效期:12个月。

附件1:

  b型流感嗜血杆菌多群IgG抗体参比品稀释

1、先用1.667 ml稀释液溶解抗血清,参比品抗体浓度为0.300μg/ml;

2、取8个洁净的玻璃小瓶或小试管,按下表稀释:

 从抗体浓度为0.300μg/ml开始进行1∶3倍倍稀释,示意图如下:

3、上述稀释的一系列参比品各取100μl加入预包酶标板上。

附件2:

人血清b型流感嗜血杆菌多群IgG抗体试剂盒(IgG)测定ELISA工作曲线(此图仅供示例用)

Fit type : Four parameter logistic : y = b+(a-b)/(1+xc)^d

Fit type : a=0.087 b=3.003 c=0.025 d=1.292 R2=0.995

关于绿竹产品中心投资者关系 新闻中心招贤纳士联系我们
公司介绍在研产品公司新闻社会招聘
公司历程免疫试剂校园招聘
公司荣誉转让产品
公司专利
关于绿竹
公司介绍公司历程公司荣誉公司专利
产品中心
在研产品免疫试剂转让产品
投资者关系
新闻中心
公司新闻
招贤纳士
社会招聘校园招聘
联系我们
Copyright © 2021 版权所有 北京绿竹生物技术股份有限公司
京ICP备 10053635号-1
京公安网备 11011202001190号